Alat Rapid Antigen: Nükleik asit tespiti temel bilgisi - Bölüm 1

Alat hızlı antijen: Nükleik asit tespiti temel bilgisi

1. Nükleik asit algılama nedir

Nükleik asidin tanımı: nükleik asit, nükleotitler veya deoksinükleotitler tarafından 3 ', 5' - fosfat diester bağından geçen bir tür biyolojik makromoleküldür.

Nükleik asit, esas olarak genetik bilgiyi depolayan ve ilan eden çok önemli biyolojik fonksiyonlara sahiptir.

2. Nükleik asitlerin sınıflandırılması

Nükleik asit makromolekülleri iki kategoriye ayrılabilir: deoksiribonükleik asit (DNA) ve ribonükleik asit (RNA).

3. Nükleik asidin bileşimi

DNA ve RNA, beş elementten oluşan bir nükleotidin başını ve kuyruğunu bağlayarak oluşturulur: C, H, O, N ve P.DNA, çoğu organizmanın genetik materyalidir. RNA, HIV, influenza, SARS virüsü, vb. Gibi birkaç DNA serbest virüsün genetik bir malzemedir. RNA'nın ortalama uzunluğu yaklaşık 2000 nükleotit ise, insan DNA'sı çok uzundur, yaklaşık 3x10 ^ 9 nükleotitlerdir.

4. Nükleik asit fonksiyonu

Protein çoğaltması ve sentezinde genetik bilgiyi depolamada ve iletmekte rol oynar. Nucleik asit, sadece temel genetik malzeme değildir, aynı zamanda protein biyosentezinde de önemli bir rol oynar. Bu nedenle, büyüme, kalıtım ve varyasyon gibi bir dizi önemli yaşam fenomeninde belirleyici bir rol oynar.

DNA ve RNA, nükleik asitlerdir. Kimyasal bileşimindeki farklılıklar nelerdir:

5. Test yöntemi

Nükleik asit algılama yöntemi, özellikle hedef nükleik asidin eşzamanlı olarak çoğaltılmasıyla ve tespit edilebilir sinyalin üretilmesiyle, numunedeki hedef nükleik asidini tespit eder. Klinik mikrobiyoloji, kan taraması, genetik hastalık tanı ve önleme, adli tıpta nükleik asit tespitine uygulanabilir. diğer alanlar.

Şu anda, kullanılan ana yöntemler aşağıdaki gibidir:

a. Nükleik asit dizisi bağımlı amplifikasyon

NASBA, bir çift primer tarafından aracılık eden RNA'nın izotermal amplifikasyonu için yeni bir tekniktir. NASBA'nın ilkesi, viral RNA'yı çıkarmak, AMV ters transkriptaz, rnase H, T7RNA polimeraz ve amplifikasyon için primerler eklemektir. Tüm reaksiyon, döngüsel olmayan faz ve döngüsel faza ayrılır: siklik fazda, astar I ve şablonda RNA, RNA: DNA hibriti oluşturmak için AMV ters transkriptazın etkisi altında CDNA'yı sentezlemek için tavlanmıştır. Polimeraz, çift sarmallı DNA, RNA'yı tanıtmak için promoter dizisi ile başlatılabilir. RNA, ters transkriptaz etkisi altında DNA'ya tersine çevrilebilir, dolaşım fazını girin ve çok sayıda şablonları yükseltir.

B. Transkripsiyon Aracılı Amplifikasyon

TMA'nın teknik prensibi temelde NASBA ile aynıdır. Hafif fark, TMA'nın MMLV ters transkriptaz ve T7RNA polimeraz kullanmasıdır. MMLV ters transkriptaz hem ters transkriptaz aktivitesi hem de RNase H aktivitesine sahiptir. Reaksiyon 41.5 ℃ 'de gerçekleştirildi ve RNA şablonu 1 saatte yaklaşık 109 kez yükseltilebilir.

C. Ligaz Katalize Zincir Reaksiyonu (LCR)

LCR, hedef molekül bağımlı oligonükleotid problarının ara bağlantısına dayanan bir prob amplifikasyon teknolojisidir. PCR.its prensibi sonrasında geliştirilen vaat eden bir in vitro amplifikasyon teknolojisidir. İki segment oligonükleotidi tek sarmallı DNA probunu hedef diziyle hibritleştirmektir. İki segment DNA probu, mutasyon olmadan şablonla geçtiğinde, iki prob, ortada bir nükleotit aralığı yoksa, ligazın etkisi altında bağlanabilir ve bağlantıdan sonra yeni zincir kullanılabilir. Şablon Yeni alt zincirler üretmek için bir sonraki döngüdeki bağlantıyı yönlendirmek için.

D. Polimeraz zincir reaksiyon tahlili (PCR)

PCR teknolojisinin temel prensibi, DNA'nın doğal replikasyon işlemine benzer ve özgüllüğü, hedef sekansın her iki ucuna tamamlayıcı olan oligonükleotit primerlerine bağlıdır.PCR, üç temel reaksiyon adımından oluşur: denatürasyon tavlama uzantısı.

① Şablonun denatürasyonu DNA: Şablon DNA, belirli bir süre için yaklaşık 93 ℃ 'ye ısıtıldıktan sonra, PCR amplifikasyonunun oluşturduğu çift iplikçik DNA veya çift iplikçik DNA'sının tek bir iplikçik oluşturulması için ayrıştırılır, böylece birleştirilebilir primerlerle bir sonraki reaksiyon turuna hazırlanmak için.

② Şablon DNA ve Astarın Tavlama (Retolding): Şablon DNA'yı ısıtıldıktan ve tek bir telin içine denatüre edildikten sonra, sıcaklık yaklaşık 55 ℃ içine düşer ve astar, şablon DNA'nın tek telinin tamamlayıcı sekansı ile eşleştirilir.

③ Astar uzantısı: Taqdna polimerazın etkisi altında, DNA şablonu primer konjugatı, temel eşleştirme prensibine göre şablon DNA zincirine tamamlayıcı olan yeni bir yarı tutturulmuş replikasyon zincirini sentezleyecek olan yeni bir yarı tutturulmuş replikasyon zincirini sentezleyecek şekilde reaksiyon hammadde ve hedef dizisi olarak DNTP'yi kullanır. Çoğaltma. Daha fazla \"Yarı tutulan replikasyon zincirleri \" elde etmek için siklik denatürasyon tavlama uzantısı işleminin üç işlemini tekrarlayın ve bu yeni zincir bir sonraki döngü için şablon haline gelebilir. Hedef geni büyütmek için 2-4 dakika ve 2-3 saat sürer. Milyonlarca kez genişletilecek. HIV RNA'yı tespit etmek için RNA'yı ters transkripsiyon reaksiyonu ile CDNA'ya ve ardından CDNA ile şablon olarak PCR amplifikasyonuna geçmemiz gerekir. Bu reaksiyon RT-PCR olarak adlandırılır.