Görüntüleme sayısı:0 Yazar:Bu siteyi düzenle Gönderildi: 2022-04-03 Kaynak:Bu site
Gerçek Zamanlı Floresan Kantitatif PCR
Gerçek Zamanlı Floresan Kantitatif PCR teknolojisi, tüm PCR işlemini gerçek zamanlı olarak izlemek için flüoresan sinyalleri kullanarak floresan sinyalleri kullanarak floresan grupları kullanarak flüoresan grup ekleme yöntemini belirtir ve nihayet bilinmeyen şablonu standart eğri ile nicel olarak analiz eder.
Bu teknolojinin prensibi, probu flüoresan grubu ile işaretlemek, floresan grubunu 5 'ucunda işaretlemek ve söndürme grubunu q işaretlemektir.
3 'ucunda. PCR amplifikasyonu olmadığında, floresan grubu, floresan grubu ile su verme grubu arasındaki yakın mekansal mesafeden dolayı floresans söndürülmez; PCR yükseltildiğinde, primer ve floresan etiketli spesifik prob şablonda birleştirilir. aynı zamanda. Floresan etiketli prob ve şablon arasındaki bağlama konumu yukarı akış ve aşağı akış primerleri arasında bulunur. Floresan probu, TAQ enziminin 5 '3' eksonükleaz aktivitesi kullanılarak hidrolize edilir ve floresan grubu serbest bırakılır. Derece söndürme grubundan uzayda ayrıldığından, floresansı yayar. Düzenlenen floresan, floresans probu tarafından tespit edilebilir, aynı zamanda, \"gerçek zamanlı \" algılamayı gerçekleştirecek şekilde, aynı anda büyütülmüş ve tespit edilebilir. Yalnızca PCR'nin Yarı kantitatiften kantitatife sıçramasını fark eder, aynı zamanda güçlü özgüllük, yüksek otomasyonun özelliklerine sahiptir ve Geleneksel PCR ile karşılaştırıldığında PCR kirliliği sorununu etkili bir şekilde çözmektedir.
Dallanmış Strand DNA Tespiti - BDNA
BDNA, PLASMA.BDNA'daki HIV tipi 1 RNA'nın nicel tespiti için bir yöntemdir. Yan zincirlerle sentetik bir DNA fragmanını belirtir. Her bir yan zincir, heyecanlı bir işaretleyici ile etiketlenebilir. HIV RNA, virüs parçacıklarından santrifüjleme yoluyla serbest bırakılır ve daha sonra yakalama probu ile mikroporlara yakalanır.
Özellikle viral RNA'nın başka bir kısmına bağlanır ve ayrıca amplifikasyon probuna bağlanır. İkincisi, daha sonra amplifikasyon probu, BDNA probu ile hibritlenir. İki hedef prob kümesi, Viral RNA.HIVRNA oligonükleotit komplekslerinin pol geninin farklı bölgelerine özellikle bağlanır. mikroporlarda oluşur. Kemilüminesans sinyali, kemilüminesans substratı ile inkübasyondan sonra büyütülebilir. PCR.BDNA ile karşılaştırıldığında, bazı HIV varyantlarını kolayca tespit edebilecek olan tüm genomu kaplayan onlarca prob vardır, ancak hassasiyet PCR olarak hassas değildir. BDNA'nın duyarlılığını arttırmak büyük bir zorluktur.
Algılama Adımları
HIV nükleik asidi nitel tespit teknolojisinin tespit işlemi, nükleik asit ekstraksiyonuna, CDNA'nın ters transkripsiyon sentezine, PCR amplifikasyon reaksiyonu, amplifikasyon ürünlerinin nitel analizi, sonuç karar ve tamamlanma raporu.
